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鸡促肾上腺皮质激素检测试剂盒操作概要
发布时间:2020-02-21   点击次数:536次

1

鸡鸡

鸡促肾上腺皮质激素

鸡促肾上腺皮质激素

((

ACTH

))

)酶联免疫

)酶联免疫

分析

试剂

盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围

::

96T

2ng/L -80ng/L

使用目的

::

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。用纯化的

鸡促肾上腺皮质激素(ACTH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次

加入促肾上腺皮质激素(ACTH),再与 HRP 标记的促肾上腺皮质激素(ACTH)抗体结合,

形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催

化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促肾上腺皮质

激素(ACTH)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线

计算样品中鸡促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度。

试剂盒组成

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(160ng/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12 孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

显色剂 B

6ml×1/

12

密封袋 1

标本

要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

80ng/L

5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

40ng/L

4 号标准品 150µl 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

20ng/L

3 号标准品 150µl 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

10ng/L

2 号标准品 150µl 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

5ng/L

1 号标准品 150µl 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液2

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl

然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3

8. 洗涤:操作同 5

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟。

10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结

::

计算3

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD

大于标准品孔d一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

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