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如何确保确保ELISA测定的特异性
发布时间:2020-09-20   点击次数:41次
    ELISA是免疫诊断中的以固相酶联免疫反应为基础的一项技术,在抗原抗体检测及病原体检测方面得到了广泛的应用,在临床及科研应用上具有重要的意义。elisa方法检测具有灵敏度高、特异性强、操作简单、样本量少等特点,无需特殊仪器,可手工操作,也可全自动化检测,且检测结果准确度高,重复性好。
  由于检测的样本量大,它不仅适用于临床标本的检查,还适合于血清流行病学筛查。ELISA根据其检测原理的不同,可分为竞争法,间接法,夹心法,捕获法等,不仅可检测大分子物质,也可检测低分子量的激素及小分子病原体。
  ELISA可检测样本多样,包括血清,血浆,细胞培养液,尿液,粪便,唾液,脑脊液,细胞裂解液,组织提取物等,可用于各样本体外定性或定量的测定。
  为了确保ELISA测定的特异性,洗板可清除非特异性结合物质,减少背景信号,增加分析的信噪比。
  手工洗板时,拍板要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离。使用半自动洗板时,应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出。为了达到较好的洗涤效果,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,即在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次。
  以HRP作为标记酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05%Tween20的中性PBS,其中,吐温20的浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低实验的灵敏度。
  
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