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分析elisa样本的处理方法
发布时间:2020-03-29   点击次数:392次
 
  为了保证ELISA实验数据的可靠性,在收集标本前都必须有一个完整的计划。我们提倡新鲜样品应尽早检测,对收集后一周内检测的样本,及时储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集样本,在取材后讲标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰箱与室温有一定温差,蛋白容易降解,直接影响实验质量,故应避免反复冻融。不同的样本请根据实际情况处理。
  elisa样本处理指南
  样品制备方法
  1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  4.细胞培养上清:检测分泌性的成分时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成分时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
  7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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