由于以渐近线开始和结束，曲线范围之外的数据可能会产生不的结果。更进一步说，试着在S中间标准曲线的线性范围内工作。一般来说，未知计算在曲线的线性范围内更。可以稀释超出标准曲线范围的样本，根据标准曲线计算浓度，然后根据初始稀释值乘以相应倍数。做ELISA标准曲线需要注意事项如下：

　　1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

　　2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

　　3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

　　4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高性。

　　5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

　　6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。