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关于Elisa试剂盒测抗原的竞争方法介绍
发布时间:2022-07-11   点击次数:174次
  当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBcELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
  Elisa试剂盒的实验步骤:
  1.以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
  2.弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
  3.加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
  4.重复第2步。
  5.加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
  6.于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
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