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ELISA试剂盒的包被问题是什么?
发布时间:2020-05-20   点击次数:325次
 
  在使用ELISA试剂盒进行实验的时候,需要注意很多问题,比如温育、显色、包被等问题。其中,包被是要特别注意的一个问题,直接关系到实验的效果。今天小编就领着大家一起来看看这其中的奥妙吧!
  包被的方式
  将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用。这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。
  大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。不易吸附的非蛋白质抗原可用间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用,包被在固相上的抗原纯度大大提高,因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法。
  ELISA试剂盒亲和素生物素即用亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。脂类物质无法与固相载体结合,可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。
  优点:试验的特异性、敏感性均由此得以改善,重复性亦佳。抗原用量少,仅为直接包被的1/10乃至于/100。
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