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人 乙醇脱氢酶 (ADH )elisa试剂盒标本要求
发布时间:2019-10-21   点击次数:552次

人 乙醇脱氢酶 (ADH ) 酶联免疫 分析
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的 :
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙醇脱氢酶(ADH)表达。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙醇脱氢酶(ADH)表达。用纯化的人乙醇脱氢
酶(ADH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中乙醇脱氢酶(ADH)相结合,经
洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的乙醇脱氢酶(ADH)抗体结合,形成
抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD
值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中人乙醇脱氢酶(ADH)的存在与否。
试剂盒组成
1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  阳性对照  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  阴性对照  0.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 张
6  显色剂 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本 要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤
1.  编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.  加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不
触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7.  温育:操作同 3。
8.  洗涤:操作同 5。
9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结 :
计算和结果判定 :
试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为乙醇脱氢酶(ADH)阴性
阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为乙醇脱氢酶(ADH)阳性

注意事项
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月

 

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