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用于ELISA测定的样品如何收集和保存?
发布时间:2019-08-19   点击次数:261次
 
  酶联免疫吸附测定(ELISA)因其具有敏感性高、特异性强等优点,被广泛应用于临床检测中的各种抗原和抗体的测定。尽管ELISA操作简单,但是小实验里也蕴含着大文章,ELISA操作各个环节对实验的检测效果影响较大,稍不注意就会产生假阳性或假阴性的结果。
  一般,ELISA可分为以下四大类:直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生。
  样品收集和保存
  用于ELISA测定常用的临床标本是血清(浆)。要注意避免严重溶血,因为血红蛋白中含有具有类似过氧化物活性的血红素基团,在孵育时很容易吸附于固相,与HRP底物反应产生假阳性。
  样品采集及血清分离中要注意避免细菌污染,一方面细菌分泌的酶可能对抗原抗体等蛋白产生分解作用,另一方面,细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶会对相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
  样品应该要避免反复冻融。因反复冻融所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。另外,样品混匀时,不要剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。
  一般而言,如果在收集样品的当天进行检测,可将样品及时储存在4℃备用;而对隔天再检测的样本,应及时分装后冻存在-20℃备用,若要长期保存样品,将其置于-70℃冻存。
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